Testul ELISA detectează numeroase boli, motiv pentru care a fost utilizat pe scară largă în medicină și nu numai. Cu toate acestea, testul ELISA este cel mai bine cunoscut pentru diagnosticul său de boala Lyme. Ce este testul ELISA? Cum să interpretăm rezultatele? Care este prețul testului?

Conținut:

  1. Test ELISA - ce detectează? Utilizarea ELISA
  2. test ELISA - care este testul?
  3. Test ELISA și boala Lyme - când se efectuează?
  4. test ELISA - preț. Cât costă un test ELISA?
  5. Test ELISA - rezultate. Pot fi fals pozitive?
  6. Test ELISA - rezultate. Pot fi fals negative?

Testul ELISA , adică testul imunosorbant legat de enzime, este o metodă de laborator folosită în mod obișnuit, care servește, printre altele, pentru detectarea cantitativă a anticorpilor în sânge.

Datorită acestuitest ELISAgăsitaplicațieîn diagnosticul bolilor bacteriene, cum ar fiboala Lyme cu Lyme.

Avantajul metodei ELISA este simplitatea, execuția rapidă și sensibilitatea ridicată. Metoda ELISA este realizată folosind plăci speciale din plastic cu godeuri umplute, de exemplu, cu proteine ​​Borrelia (antigene) și anticorpi monoclonali specifici, care sunt concepute pentru a detecta anticorpi în proba pacientului.

Test ELISA - ce detectează? Utilizarea ELISA

Sensibilitatea ridicată și simplitatea metodei ELISA au făcut-o aplicabilă în diagnosticul multor boli, dar este cel mai bine cunoscută ca metodă de diagnosticare a bolii Lyme.

În diagnosticul de borelioză Lyme, așa-numita ELISA indirectă, care permite detectarea IgM sau IgG specifice în materialul testat. În același mod, anticorpii pot fi detectați în scopuri de diagnostic:

  • infecții virale: virusuri herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusuri hepatite (HBV și HCV)
  • infecții cu protozoare: toxoplasmoză, giardioză
  • boli autoimune: boala celiacă (anticorpi anti-tTG sau anti-DPG), boala Hashimoto (anticorpi anti-TG și anti-TPO), boli inflamatorii intestinale (anticorpi anti-ASCA și anti-ANCA)
  • boli parazitare și alergii,în care sunt detectaţi anticorpi IgE specifici. Nivelul crescut al acestora poate indica prezența alergiilor, de exemplu la polen și alimente, sau invazii parazitare (tenie înarmată, viermi rotunzi umani)

Există și modificări ale metodei ELISA (așa-numita ELISA sandwich), care permit detectarea unei probe testate de proteine, altele decât anticorpii. Apoi, scopul cercetării este de a detecta în materialul biologic:

  • fragmente de viruși sau bacterii, cel mai adesea acestea sunt antigene specifice unui anumit agent patogen
  • hormoni serici, de exemplu estrogen, prolactină, TSH, fT4, cortizol
  • enzime, de exemplu, calprotectină, elastază pancreatică, fosfatază alcalină
  • de markeri tumorali, de exemplu, CA-125
  • prezența medicamentelor în ser

Această metodă este folosită și în industria alimentară, unde pot fi detectate urme de alergeni (de exemplu, lapte, arahide), OMG-uri sau toxine în alimente.

test ELISA - ce este acest test?

Diagnosticul, de exemplu, a borreliozei Lyme folosind metoda ELISA constă în detectarea proteinelor imune din materialul biologic - anticorpi care apar în timpul răspunsului împotriva antigenelor Borrelia.

Anticorpii sunt testați în două clase, IgM și IgG. IgM sunt primii anticorpi care apar în organism la contactul cu bacteriile și care scad în timp.

Locul lor este luat de anticorpi IgG mai persistenti care pot rămâne în organism câteva zeci de ani.

În acest fel, prezența bacteriilor în organism este testată indirect prin detectarea anticorpilor direcționați specific împotriva spirochetelor Borrelia.

Anticorpii în diferite stadii de infecție pot fi direcționați împotriva unei varietăți de proteine ​​Borrelia. De exemplu, într-un stadiu incipient este proteina p41.

În etapele ulterioare, încep să apară tot mai multe proteine, cum ar fi p21, p30, p39, p43. Acesta este motivul pentru care diagnosticul bolii Lyme este extrem de dificil.

Selectarea proteinelor bacteriene este extrem de importantă pentru ca testul să aibă o valoare diagnostică ridicată. Prin urmare, în mod obișnuit, în diagnosticul bolii Lyme, trebuie utilizate teste ELISA de a II-a sau a III-a generație, în care seturile de proteine ​​sunt selectate astfel încât să se obțină cel mai fiabil rezultat.

test ELISA și boala Lyme. Când să cânte?

Borrelioza Lyme este o boală bacteriană cauzată de bacteria Borrelia burgdorferi și de numeroasele sale soiuri.

Diagnosticul bolii nu este ușor din cauza complexității răspunsului imun împotriva Borrelia și a imperfecțiunilor metodelor de laborator.

Cea mai utilizată metodă de laborator este metoda ELISA foarte sensibilă, care detectează anticorpi specifici produși împotriva proteinelor bacteriene.

În diagnosticul borreliozei Lyme, se utilizează o metodă ELISA indirectă în care se disting următoarele etape:

  • incubarea godeurilor de pe placă cu material colectat de la pacient, de exemplu ser. Dacă în materialul testat există anticorpi împotriva Borrelia, aceștia se leagă de proteinele din fundul godeului de reacție
  • apoi excesul de ser este clătit cu un lichid de spălare special (tampon) și așa-numitul conjugat, adică un anticorp legat de o enzimă care se leagă de anticorpi legați anterior din godeurile de reacție
  • Substratul pentru conjugat este adăugat mai târziu și nu există nicio reacție (pozitivă) sau nicio reacție de culoare (negativă)
  • ultimul pas este citirea de către cititor (spectrofotometru) a concentrației de anticorpi împotriva Borrelia din serul pacientului

Metoda ELISA pentru boala Lyme se efectuează cu sânge, iar în cazul simptomelor neurologice (neuroborrelioză), tot cu lichidul cefalorahidian.

Lichidul sinovial nu trebuie testat deoarece există o probabilitate mare de rezultate fals pozitive.

Baza pentru diagnosticul bolii sunt simptomele clinice care o indică, confirmate de rezultatele analizelor de laborator.

Adăugarea unui rezultat al unui test de laborator fără prezența simptomelor nu autorizează diagnosticarea bolii Lyme, deoarece s-a demonstrat că anticorpii la spirochetele Borrelia sunt detectați și la persoanele sănătoase.

Diagnosticul serologic al borreliozei Lyme începe cu un test de screening ELISA semi-cantitativ. Dacă rezultatul este negativ, înseamnă că nu au fost detectate spirochete Borrelia sau rezultatul este fals negativ.

Dacă rezultatul este pozitiv sau slab pozitiv (echivoc), testare Western blot de confirmare, care este foarte specifică.

Aceasta este pentru a confirma „veridicitatea” rezultatelor obținute cu metoda ELISA. În timpul diagnosticării, nu puteți sări peste niciunul dintre pașii de mai sus și, de exemplu, să efectuați diagnostice folosind metoda Western blot sau să faceți un diagnostic bazat pe un rezultat pozitiv numai folosind metoda ELISA.

În Polonia, diagnosticul bolii Lyme se încheie foarte des în prima etapă de screening, ceea ce provoacă o interpretare greșită a rezultatelor pozitive sau slab pozitive.

Merită știut

Test ELISA - preț. Cât costă un test ELISA?

Testul costă în jur de 60zloți și se face imediat. Cu toate acestea, puteți aștepta aproximativ trei luni pentru rezultatele sesizării.

Test ELISA - rezultate. Pot fi fals pozitive?

Rezultate fals pozitive rezultă din reactivitatea încrucișată a anticorpilor IgM cu alte proteine. Anticorpii produși de organism pot recunoaște „incorect” un antigen al altor microorganisme ca antigen Borrelia.

Cele mai frecvente „greșeli” apar la persoanele infectate cu treponema pallidum, virusuri herpetice și la persoanele cu lupus eritematos sistemic și alte boli reumatice.

Test ELISA - rezultate. Pot fi fals negative?

Pot apărea rezultate fals negative în stadiul incipient al infecției, apoi testul trebuie repetat după aproximativ 3-4 săptămâni. Aceasta se numește fereastra serologică, adică perioada inițială de infecție în care organismul nu a „reușit” încă să producă anticorpi specifici.

În mod similar, la persoanele imunodeprimate care nu produc suficienți anticorpi.

O mare problemă, mai ales în cazul infecțiilor foarte intense, este apariția așa-numitelor complexe imune care constau din antigene spirochete Borrelia și anticorpi specifici pentru acestea.

Acest lucru face anticorpii „invizibili” pentru metodele utilizate în mod obișnuit, cum ar fi ELISA și, deși sunt prezenți în materialul testat, nu pot fi detectați.

În astfel de cazuri, laboratorul poate folosi descompunerea complexelor imune. Acest tratament este conceput pentru a elibera anticorpii. Cu toate acestea, această metodă nu este utilizată pe scară largă din cauza lipsei de standardizare în laboratoare.

Merită știut

De ce nu este ușor diagnosticarea bolii Lyme?

Acest lucru se datorează complexității răspunsului imun împotriva Borrelia și limitărilor metodelor de laborator. Diversitatea soiurilor și apariția de noi infecții cauzatoare de infecții, în special pe continentul european, nu facilitează dezvoltarea unor metode eficiente de diagnostic.

Mai multe soiuri au apărut recent în Europa, precum Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana și Borrelia spielmanii. În plus, în organism, spirochetele Borrelia se pot transforma în chisturi sau pot rămâne în locuri ale corpului inaccesibile celulelor sistemului imunitar.

Fiind astfel „invizibil” pentru sistemul imunitar. În plus, s-a demonstrat că țesuturile pot conține fragmente de bacterii care au proprietăți puternic proinflamatorii. Se crede că aceștia sunt responsabili pentru simptomele cronice ale bolii Lyme, în ciuda rezultatelor negative ale studiuluilaborator.

Referințe

1. Witecka-Knysz E. și colaboratorii Boala Lyme: de ce este diagnosticul atât de dificil? Diagnostic laborator aprilie 2007.2. Moore A. și colab., Orientări curente, capcane clinice comune și direcții viitoare pentru diagnosticul de laborator al bolii Lyme, Statele Unite. Emerg Infect Dis. 2016 iulie, 22 (7) .3. Diagnosticul de laborator al bolilor transmise de căpușe.Recomandările Grupului de Lucru: Camera Națională a Medicilor de Laborator, Institutul Național de Sănătate Publică-Institutul Național de Igienă, Consultant Național în domeniul bolilor infecțioase, Departamentul de Boli Infecțioase și Neuroinfecții, Universitatea de Medicină din Białystok, Societatea Poloneză de Virologie, Varșovia 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2022.

Despre autorKarolina Karabin, MD, PhD, biolog molecular, diagnostician de laborator, Cambridge Diagnostics PolskaBiolog de profesie, specializat in microbiologie, si diagnostician de laborator cu peste 10 ani de experienta in munca de laborator. Absolvent al Colegiului de Medicină Moleculară și membru al Societății Poloneze de Genetică Umană, șef de granturi de cercetare la Laboratorul de Diagnostică Moleculară din cadrul Departamentului de Hematologie, Oncologie și Boli Interne al Universității de Medicină din Varșovia. A susținut titlul de doctor în științe medicale în domeniul biologiei medicale la Facultatea I de Medicină a Universității de Medicină din Varșovia. Autor al multor lucrări științifice și populare în domeniul diagnosticului de laborator, al biologiei moleculare și al nutriției. Zilnic, în calitate de specialist în domeniul diagnosticului de laborator, conduce departamentul de conținut la Cambridge Diagnostics Polska și cooperează cu o echipă de nutriționiști de la CD Dietary Clinic. Împărtășește cunoștințele sale practice despre diagnosticarea și terapia dietetică a bolilor cu specialiștii la conferințe, sesiuni de formare și în reviste și site-uri web. Este deosebit de interesată de influența stilului de viață modern asupra proceselor moleculare din organism.

Categorie:

Cercetare