Ajutați dezvoltarea site -ului, împărtășind articolul cu prietenii!

PCR este un test care a fost folosit în diagnosticarea multor boli. Metoda PCR permite să se arate prezența directă a bacteriilor în organism și în special ADN-ul acestuia. PCR este utilizată, printre altele, în în diagnosticul bolii Lyme. Ce este tehnica PCR? Ce este PCR în timp real?

Conținut:

  1. PCR (test) - care este tehnica PCR?
  2. PCR (test) - aplicarea metodei PCR
  3. PCR (test) - boala Lyme
  4. PCR (test) - rezultate. Pot fi fals pozitive?
  5. PCR (test) - rezultate. Pot fi fals negative

PCR(reacția în lanț a polimerazei) este metoda principală folosită în laboratoarele genetice și moleculare. A fost dezvoltat în 1983 de Kara Mullis, care a primit Premiul Nobel în 1993 pentru el.

PCR (test) - care este tehnica PCR?

Testul PCRconstă în amplificarea multiplă (de obicei în 30-40 de cicluri) a unui fragment specific de ADN, de exemplu gene care codifică proteinele Borrelia, cu utilizarea enzimei polimerazei.

Apoi, pentru a vizualiza fragmentul de ADN amplificat, se folosesc coloranți moleculari speciali. PCR, datorită amplificării fragmentelor specifice de ADN, este o metodă ultra-sensibilă.

În metoda PCR, fragmentele de ADN sunt amplificate folosind perechi de primeri specifice pentru o anumită regiune a ADN-ului bacterian. De exemplu, regiunile țintă PCR utilizate în diagnosticul bolii Lyme sunt gene care codifică proteine, de ex. 16S ADNr, recA, fla, p66, OspA.

Materialul biologic din care poate fi efectuat testul este:

  • sânge
  • secțiune de piele de la eritem migrator
  • lichid cefalorahidian
  • lichid sinovial sau cartilaginos
  • urină

PCR (test) - aplicarea metodei PCR

Pe lângă diagnosticul de borelioză Lyme, metoda PCR poate detecta fragmente specifice de ADN ale altor microorganisme sau ale oamenilor. Prin urmare, metoda PCR este folosită și în:

  • diagnosticul și monitorizarea infecțiilor virale: virusuri herpetice (virusul herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusurile hepatitei (HBV și HCV)
  • diagnosticarea și monitorizarea infecțiilor bacteriene, în special a acelor bacterii,care nu pot fi identificate prin culturi, de exemplu tuberculoza
  • diagnosticul și monitorizarea bolilor neoplazice: leucemie, cancer de sân, cancer colorectal, cancer pulmonar
  • diagnostic de predispoziție la cancer: cancer mamar și ovarian (genele BRCA1 și BRCA2), cancer colorectal (genele APC și CHEK2)
  • diagnostic de boli genetice: hemocromatoză (gena HFE), talasemie (gene HBA1 și HBA2), boala celiacă (gene HLA)
  • teste de paternitate, care detectează compatibilitatea ADN a copilului și a tatălui
Merită știut

În prezent, există multe modificări ale metodei PCR. De exemplu, în diagnosticul bolii Lyme, sunt utilizate în principal metodele de PCR imbricată (PCR imbricată) și PCR în timp real ( ). Aceasta din urmă este o metodă cantitativă și permite determinarea numărului exact de copii ADN Borrelia din materialul biologic testat.

PCR (test) și boala Lyme

Baza pentru diagnosticul bolii Lyme este testarea serologică. Cu toate acestea, există situații clinice care pot determina ca aceste teste să fie fals negative:

  • fereastră serologică, adică perioada inițială de infecție în care organismul nu produce încă anticorpi IgM și IgG specifici împotriva Borrelia
  • la persoanele imunodeprimate care nu produc suficienți anticorpi
  • prezența complexelor imune care constau din antigene Borrelia și anticorpi specifici pentru aceștia și previn detectarea anticorpilor prin metode serologice

Dacă pacientul este suspectat că prezintă simptome ale bolii Lyme, iar rezultatele testelor serologice sunt negative, se poate efectua un test molecular bazat pe metoda PCR.

ADN-ul spirochetelor Borrelia poate fi detectat în stadiile incipiente ale infecției, deoarece numărul de spirochete din fluidele corporale este atunci cel mai mare.

În diagnosticul boreliozei Lyme, metodele serologice precum ELISA sunt utilizate în primul rând, dar în unele situații clinice testarea genetică folosind metoda PCR este de ajutor.

Cu cât timpul de la infecție este mai lung, cu atât probabilitatea de a detecta ADN bacterian este mai mică. Prin urmare, în unele cazuri, înainte de efectuarea testului PCR, bacteriile sunt crescute pe medii speciale timp de 1-2 săptămâni și apoi se efectuează testul.

Această abordare este utilizată în cazul suspiciunii de boală Lyme Lyme și lichid cefalorahidian recoltat. În faza târzie a infecției, este mai potrivit să se efectueze un test ELISA.

Metoda PCR nu trebuie utilizată în diagnosticul de rutină al bolii Lyme din cauza lipsei de standardizareprivind apariția soiurilor Borrelia burgdorferi în Polonia.

Cu toate acestea, în cazul dificultăților de diagnostic (mai ales în stadiul incipient al bolii), rezultatul testului PCR este de ajutor în procesul de diagnosticare.

Un rezultat pozitiv al testului înseamnă că prezența ADN-ului Borrelia burgdorferi și a variantelor acestuia a fost detectată în materialul testat, dar nu explică dacă organismul este infectat activ. Pe de altă parte, un rezultat negativ nu exclude prezența bacteriilor în organism.

Unele laboratoare oferă teste pentru prezența ADN-ului Borrelia în căpușă. Cu toate acestea, rezultatul unui astfel de test nu este baza pentru diagnosticul bolii Lyme la o persoană mușcată.

PCR - rezultate. Pot fi fals pozitive?

PCR este o metodă ultra-sensibilă și în același timp foarte sensibilă la contaminare. Prin urmare, este foarte important în testarea bazată pe PCR să se selecteze un control intern adecvat pentru a exclude rezultatele fals pozitive.

Colectarea corectă a materialului pentru teste, precum și experiența și fiabilitatea diagnosticianului care efectuează testul sunt, de asemenea, de o importanță esențială.

PCR - rezultate. Pot fi fals negative

Ca în orice test de laborator, și în metoda PCR, pot apărea rezultate fals negative. Aici este esențial să colectați sânge pentru un anticoagulant adecvat, deoarece unele dintre ele, cum ar fi heparina, pot inhiba reacția PCR.

Colectarea de material după începerea terapiei cu antibiotice poate scădea eficiența reacției PCR și poate crește probabilitatea rezultatelor fals negative.

De asemenea, trebuie amintit că bacteriile Borrelia trăiesc foarte puțin timp în sânge și fluide corporale, deoarece datorită receptorilor speciali pătrund foarte repede în locurile „greu accesibile” din organism.

Prin urmare, spre deosebire de diagnosticul altor microorganisme, numărul de spirochete Borrelia din materialul biologic este mic, uneori chiar la limita de detectare a metodei PCR. Acest lucru poate provoca, de asemenea, un fals negativ.

Referințe

  1. Dunaj J. et al.Importanța metodei PCR în diagnosticul borreliozei Lyme. Naviga Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Diagnosticul de laborator al bolilor transmise de capuse Recomandarile Grupului de Lucru: Camera Nationala a Diagnosticienilor de Laborator, Institutul National de Sanatate Publica-Institutul National de Igiena, Consultant National in domeniul bolilor infectioase, Departamentul Boli Infectioase si Neuroinfectii , Universitatea de Medicină din Białystok, Societatea Poloneză de Virologie, Varșovia 2014 .
  3. Ružić-Sabljić E. și Cerar T. Progresul în diagnosticul molecular al bolii Lyme. Expert Rev Mol Diagn. 202217 ianuarie (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al. Principii și aplicații ale reacției în lanț a polimerazei în domeniile diagnosticului medical: o revizuire. Braz J Microbiol. 2009 ianuarie-martie; 40 (1): 1-11.
Despre autorKarolina Karabin, MD, PhD, biolog molecular, diagnostician de laborator, Cambridge Diagnostics PolskaBiolog de profesie, specializat in microbiologie, si diagnostician de laborator cu peste 10 ani de experienta in munca de laborator. Absolvent al Colegiului de Medicină Moleculară și membru al Societății Poloneze de Genetică Umană, șef de granturi de cercetare la Laboratorul de Diagnostică Moleculară din cadrul Departamentului de Hematologie, Oncologie și Boli Interne al Universității de Medicină din Varșovia. A susținut titlul de doctor în științe medicale în domeniul biologiei medicale la Facultatea I de Medicină a Universității de Medicină din Varșovia. Autor al multor lucrări științifice și populare în domeniul diagnosticului de laborator, al biologiei moleculare și al nutriției. Zilnic, în calitate de specialist în domeniul diagnosticului de laborator, conduce departamentul de conținut la Cambridge Diagnostics Polska și cooperează cu o echipă de nutriționiști de la CD Dietary Clinic. Împărtășește cunoștințele sale practice despre diagnosticarea și terapia dietetică a bolilor cu specialiștii la conferințe, sesiuni de formare și în reviste și site-uri web. Este deosebit de interesată de influența stilului de viață modern asupra proceselor moleculare din organism.

Ajutați dezvoltarea site -ului, împărtășind articolul cu prietenii!

Categorie:

Cercetare